Производитель
средств
биобезопасности

ELISA ТА ПЛР: особливості методів діагностики

ELISA чи ПЛР? У яких випадках який з методів використовувати?

ELISA — просто та зручно

Коли тварина інфікована, її імунна система реагує, продукуючи антитіла проти збудника хвороби. ELISA (enzyme-linked immuno sorbent assay) ІФА (імуноферментний аналіз) або, точніше, ферментний імуносорбентний аналіз — це імунологічний метод дослідження призначений для виявлення певних антигенів в реакції антиген-антитіло.Цей метод використовують здебільшого для проведення широкомасштабного епізоотичного спостереження та досліджень при запровадженні програм контролю хвороб. Це — високочутливий, специфічний, простий, швидкий та економний у виконанні метод лабораторних досліджень, що дозволяє легко відтворювати та інтерпретувати результат.Нещодавно розроблено нові варіанти ІФА, що містять неінфекційні реагенти на основі рекомбінантних білків вірусу p32, p54 і pp62. Вони також проявляють високу чутливість і специфічність при дослідженні сироваток крові навіть за низької її якості.

Якщо в крові тварини виявлено специфічні антитіла до певного збудника, це вказує, що тварина була інфікована. Однак самого збудника на момент дослідження крові в організмі тварини може вже і не бути.

Метод ELISA можна використовувати також і для спостереження за станом здоров’я тварин у стаді, відстежуючи наявність в їх організмі специфічних антитіл. Вагомим його плюсом є тривалий період часу для виявлення інфекції та імовірність ідентифікації тварин, які перехворіли до цього. ELISA часто використовують у «польових умовах», оскільки він легкий у виконанні: антитіла у крові відносно стабільні, а відбір та транспортування зразків — проста процедура.

ELISA доступний уже понад 20 років і дозволяє контролювати стан здоров’я тварин у стаді, виявляючи наявність специфічних антитіл до збудників інфекцій, що можуть зберігатися в крові тварини впродовж всього життя, а також дозволяє ідентифікувати нову інфекцію в стаді.

Наприклад, вірус грипу свиней активно поширюється у стаді впродовж 3–5-и діб, і, як правило, захворювання в цей період не ідентифікують. ELISA-діагностика дозволяє виявляти збудник і налагодити практики менеджменту таким чином, щоб швидше реагувати у випадку повторного захворювання.

ПЛР — достовірність та швидкість результатів

ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) найчастіше використовувана технологія для виявлення вірусу. Вона вимагає професійних навичок і достатнього досвіду як на стадії постановки реакції (щоб не допустити хибно-позитивного результату), так і на стадії пробо-підготовки (щоб не контамінувати зразки). ПЛР є надзвичайно чутливою і специфічною технологією виявлення вірусу шляхом ампліфікації вірусної ДНК з досліджуваного зразка.

Нині метод ПЛР широко використовують референтні лабораторії для діагностики та остаточного підтвердження АЧС — дослідженні зразків тканин і сироваток крові від тварин з клінічними ознаками хвороби. Цей метод дозволяє виявити вірус у крові хворих тварин уже з 2-ої доби після зараження і впродовж кількох тижнів. Він базується на застосуванні праймерів комплементарних консервативній ділянці геному АЧС і дозволяє виявляти широкий діапазон відомих ізолятів вірусу АЧС, включаючи гемадсорбуючі і негемадсорбуючі штами.

ПЛР-діагностику можна використовувати і для дослідження зразків низької якості — малопридатних для досліджень іншими методами.

Є два різних методи ПЛР-діагностики вірусу АЧС. Для обох необхідними є пробо-підготовка та етап виділення ДНК перед безпосереднім проведенням ПЛР-досліджень:

  • Стандартна ПЛР: продукти реакції, отримані в результаті ампліфікації вірусної ДНК, аналізуються за допомогою електрофорезу в агаровому гелі і УФ спектрі світла.
  • ПЛР в режимі реального часу. Цей метод досліджень передбачає використання спеціального обладнання для виявлення флуоресцентного сигналу. Він має кілька переваг: аналіз результатів в ході реакції (реальному часі), можливість кількісного визначення вірусної ДНК, не потребує проведення електрофорезу. Подальше секвенування продуктів ПЛР дозволяє підтвердити позитивні результати реакції, і визначити генотип вірусу при ампліфікації деяких фрагментів геному вірусу (ген p72, ген p54, центральний варіабельний регіон — CVR).

Одна із переваг ПЛР діагностики — можливість виявлення зараження тварини на ранніх стадіях захворювання, коли організм ще не виробив специфічних антитіл.

Як і у випадку із застосуванням ELISA, результати ПЛР-тесту можна отримати досить швидко (зазвичай упродовж кількох годин). Наприклад, перевірка сперми кнурів на наявність вірусів триватиме 5–6 годин.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *